Biochemie Praktikum [antikvár]

1. ENZYME 1.1. Die Affinitätschromatografie Das Grundprinzip der Affinitätschromatografie: Die Affinitätschromatografie stellt ein Trennverfahrcn dar, welches auf einer biospezifischen Wechselwirkung von Makromolekülen (Enzyme, Eiweisse) mit ihren Substraten bzw. Inhibitoren (im allgemeinen Ligande genannt) beruht: E (Enzyme, Eiweisse) + L (Substrat, Inhibitor) =EL; [E] [L] Kd=-Kd^^^ [EL] Kd weist in dem zur Bildung des Komplexes EL führenden Gleichgewicht einen sehr kleinen Wert auf (etwa 10'^ - 10'^), die Entstehung des Komplexes ist ein selektiver Vorgang. Die Affinitätschromatografie ist dann anwendbar, wenn man nach Eintritt des Gleichgewichtes (1) die unreagier-ten Moleküle entfernt und das Komplex EL zersetzen kann. Die Zersetzung des Komplexes EL, die Elution kann durch Temperaturgradient, pH-Gradient, Salzgradient, bzw. mit einer Kompetitor-Verbindung durchgefüht werden.